よくある質問 | LONG® R³ IGF-I
はい、長いです® R3 IGF-I 100mLおよび50mg*はcGMP基準に従って製造されています。製造施設は、欧州および米国の契約製造業者およびバイオ医薬品企業による定期的な監査を受けています。
*すべての製品は GMP ガイドラインに従って製造されていますが、製造に使用するために完全な GMP 検証を受けているのは、大容量パックのみです。
いいえ、長いです® R3 IGF-Iは、cGMPグレードの組み換えタンパク質であり、 E。大腸菌。 動物由来成分を含まないプロセスを使用して、哺乳類細胞培養用に特別に製造されています。LONG® R3 IGF-I は規制に準拠しており、現在、FDA (米国)、EMEA (欧州)、MHLW (日本) によって承認されたいくつかのバイオ医薬品の製造に使用されています。
長いです® R3 IGF-Iは、独自の、しかし従来の発現システムで製造されています。検証済みのワーキングセルバンクから採取した細胞は、動物性成分を含まない培地を用いて、フェドバッチ法で発酵されます。組換えLONG® R3 次に、IGF-I は封入体から分離され、酸化還元緩衝液で再折り畳みされ、4 段階のクロマトグラフィー プロセスによって精製されます。
長いです® R3 IGF-I は、凍結乾燥粉末、および 1 mM 酢酸中の 100 mg/mL 液体製剤として入手可能です。
長いです® R3 IGF-Iは、Repligen社から5mgまたは50mgサイズのバイアル入り凍結乾燥粉末として入手可能です。LONGの1mg/mL液剤も販売されています。® R3 IGF-I は、5 mL、100 mL、250 mL、500 mL、1,000 mL のサイズで提供されます。
外観、製品の識別（RP-HPLC、質量分析）、純度、生物活性、バイオバーデンおよび細菌エンドトキシン分析。
凍結乾燥LONG® R3 IGF-I は使用前に再構成する必要があります。
- 製品は、わずかに真空状態（-25 kPa）の窒素雰囲気下で供給されます。
- ガラスバイアルから金属キャップを外し、隔壁を通して空気を満たした注射器を挿入し、圧力を均等にします。
- 100mg/mLの濃度になるように、バイアルに1mM酢酸溶液を加える。® R3 IGF-I。ストック溶液は1mg/mL以上に保つことをお勧めします。
- ペプチドが完全に溶解するように溶液をよく混ぜます。
- 再停止LONG® R3 IGF-I、またはLONGを含む培地® R3 IGF-I は、孔径 0.22 μm のポリフッ化ビニリデン (PVDF) やポリエーテルスルホン (PES) などのタンパク質結合の低い膜を通して濾過することができます。
液体LONG® R3 IGF-Iはすぐに使用できます。解凍や再溶解は不要です。開封して細胞培養培地に直接希釈するだけです。
研究によると、LONGのごく一部が® R3 IGF-Iは濾過中に失われます。次の表は、LONGの量を示しています。® R3 IGF-I は特定の種類のフィルター膜では失われます。
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フィルタの種類 |
LONGの損失率® R3 IGF-I |
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0.2 μm ポリエーテルスルホン（PES） |
2% |
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0.1 μm ポリエーテルスルホン（PES） |
5% |
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0.2 μm ポリビニリデン（PVDF） |
<1％で |
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0.1 μm ポリビニリデン（PVDF） |
6% |
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0.2 μm セルロースアセテート（CA） |
11% |
はい、Repligen社ではLONGを測定するための酵素免疫測定（ELISA）キットを販売しています。® R3 サンプル中の IGF-I 濃度。
粉末を細胞培養培地に溶かすことはお勧めしません。
インスリンやすべての小さなペプチドのようにLONG® R3 IGF-Iは、タンパク質含有量の低い培地では、プラスチック、ガラス、ステンレス鋼の表面に非特異的に吸着することがあります。この吸着は通常は最小限であり、細胞培養全体のパフォーマンスには影響しません。しかし、サンプルの取り扱い手順が不適切であったり一貫性がなかったりすると、LONGの精度に影響を与える可能性があります。® R3 IGF-I 検出。
LONGの非特異的吸着を最小限に抑える® R3 IGF-I
- LONGのストック溶液を再構成する® R3 IGF-Iが1mg/mL以上。
- 常に、PVDF や PES などのタンパク質結合特性が低いフィルターを使用してください。
- 該当する場合はLONGを追加® R3 IGF-I を培地製造プロセスのできるだけ下流、できれば発酵タンクに直接送ります。
凍結乾燥LONG® R3 IGF-Iは2～8℃で適切に保管すればXNUMX年間安定している。οC. 液体LONG® R3 IGF-Iは、未開封の元のバイアルでは、2～8℃で保管した場合、XNUMX年間安定しています。οC.
再構成凍結乾燥LONG® R3 IGF-I、および液体LONGの開封容器® R3 IGF-Iは、元のバイアルに再キャップして2～8℃で保管してください。οC.
調製後は、少量（単回使用用）に小分けし、LoBindエッペンドルフチューブに入れて2～8℃で保存できます。タンパク質の吸着を防ぐため、LoBindチューブの使用を推奨します。この条件で保存した溶液は12ヶ月間使用できます。
LONG測定の一貫性と正確性を確保するため® R3 IGF-I については、以下をお勧めします。
- 細胞培養培地サンプルのサンプリングおよび取り扱いの手順を標準化します。
- サンプルの取り扱いと保管に最適な、タンパク質結合の少ないチューブの種類を決定します。
- サブサンプリングを避け、表面への繰り返しの露出を最小限に抑えます。
- 培地またはチューブ内にキャリアタンパク質が存在すると、非特異的吸着を防ぐことができます。
- 分析前にすべてのサンプルが室温に戻っていることを確認してください。
はい、Repligen社ではLONGを測定するための酵素免疫測定（ELISA）キットを販売しています。® R3 サンプル中の IGF-I 濃度。
長いです® R3 IGF-IはCHO細胞培養において細胞増殖と全体的な体積生産性を向上させることが示されています。さらに、LONG® R3 IGF-I は、アポトーシスを減らし、培養期間を延長することでタンパク質の生産を高める可能性があります。
I型IGF受容体を持つ、またはインスリン感受性のあるすべての細胞は、LONGに反応する可能性があります。® R3 IGF-I。このグループには、チャイニーズハムスター卵巣細胞（CHO）、線維芽細胞、ハイブリドーマ、胚性幹細胞（ES）、ナチュラルキラー細胞（NK）、間葉系幹細胞（MSC）、造血幹細胞（HSC）など、商業的に使用されているほとんどの細胞株が含まれますが、これらに限定されません。
滅菌LONGの希釈度が大きいため® R3 IGF-I を細胞培養培地に添加しても、pH や浸透圧には影響はありません。
LONGの作業濃度範囲® R3 IGF-Iは10～100μg/Lです。最初は50μg/Lから始め、その後滴定を行い、細胞株、プロセス、アプリケーションに合わせて濃度を最適化することをお勧めします。
直接的または連続的な適応は、細胞をLONGに適応させるために使用できる方法論である。® R3 IGF-I含有培地。適応プロセスを開始する前に、細胞は対数増殖期中期にあり、生存率が90%以上である必要があります。
- 直接
いくつかのクローンは離乳を必要とせず、適切な量のLONGを含む培地ですぐに培養できる。® R3 IGF-I（通常10〜100μg/L）。
- シーケンシャル
頑健性の低いクローンは、新しい培地に順次適応させる必要がある場合があります。まず、LONG® Rを含む培地と含まない培地を25%:75%の割合で混合し、細胞を継代培養します。3 IGF-I。細胞生存率が90%を超え、細胞倍加時間が安定している場合は、細胞を次の培地混合比（例：50%:50%）に移行できます。増殖が遅くなったり、生存率が低下したりした場合は、生存率と倍加時間が安定するまで、同じ培地で継代培養を継続してください。
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手順 |
% 開始メディア |
LONG®Rを含む%培地3IGF-I |
次のステップに進むための基準 |
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1 |
75 |
25 |
生存率90%以上、細胞倍加時間は安定 |
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2 |
50 |
50 |
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3 |
25 |
75 |
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4 |
0 |
100 |
LONGの組み合わせ® R3 IGF-Iとインスリンは一部の細胞株に有益な可能性があります。LONGの量を推奨します。® R3 IGF-I は、さまざまな細胞株、アプリケーション、プロセスでの使用に合わせて最適化できます。
長いです® R3 IGF-Iはヒトへの使用が承認または許可されていません。RepligenはLONG® R3 IGF-I は、細胞培養の補充またはその他の研究目的での使用を明示的に許可された顧客にのみ提供されます。