MabSelect SuRe™ ELISAキットの性能概要
はじめに
プロテインA ELISAキット（カタログ番号 9333-1）は、残留MabSelect SuRe™リガンドの検出および定量を目的としています。当社のプロテインA検出ELISAキットは、抗体製品に混入する微量のMabSelect SuRe™リガンドを高感度で測定する必要があるお客様向けに開発されました。汚染検査は、開発段階および商業生産段階の複数の段階で実施されます。具体的には、以下の段階が含まれます。
- 特定の条件下での樹脂の浸出特性に関するプロセス開発
- 製造、通常は精製プロセスの複数のポイントで採取した溶出サンプルから
- プロセスの封じ込めレベルとロット間の一貫性を文書化するために製品リリースを完了する
以下のサマリーレポートには、ヒト免疫グロブリンG（hIgG）存在下でのProtein A ELISAキットの評価から収集された性能データが含まれています。ここに示すデータは、Protein A ELISAキットの以下の性能を実証しています。
- PBS-T緩衝液中の最大0.5 mg/mlのhIgG存在下でMabSelect SuRe™リガンドを検出する能力
- 回収率（精度）、アッセイ間およびアッセイ内精度、定量限界および検出限界
結果の概要
hIgG存在下でのMabSelect SuRe™
プロテインA ELISAキットの性能は、hIgG存在下でMabSelect SuRe™リガンドを検出した場合と、hIgGを含まない標準液と比較して評価されました。添加したすべてのサンプルのhIgG最終濃度は0.125 mg/mlでした（アッセイプレートへの最終希釈後）。各サンプルは8回繰り返し調製し、キットの標準プロトコルに従ってXNUMX回のELISAを実施しました。
データ処理
標準曲線のデータポイントは4パラメータ近似解析に当てはめられました。この式により、サンプル中のrPA濃度の逆算とLoQ値の算出が可能になりました。回収率は以下のように計算されました。
アッセイ内精度
表1. 標準曲線サンプルのアッセイ内精度
| 濃度（ng/ml） | 平均%CV |
|---|---|
| 1.6 | 5.1 |
| 0.8 | 2.3 |
| 0.4 | 3.3 |
| 0.2 | 4.0 |
| 0.1 | 5.2 |
| 0.05 | 7.5 |
表2. hIgGを含むサンプルのアッセイ内精度
| 濃度（ng/ml） | 計算された濃度 | 平均%CV |
|---|---|---|
| 1.2 | 1.25 | 6.1 |
| 1.0 | 1.01 | 5.3 |
| 0.8 | 0.76 | 4.1 |
| 0.6 | 0.64 | 4.9 |
| 0.4 | 0.37 | 5.4 |
| 0.2 | 0.18 | 7.7 |
| 0.1 | 0.09 | 11.0 |
| 0.05 | 0.05 | 18.0 |
アッセイ間精度
表3. 標準曲線サンプルのアッセイ間精度
| 濃度（ng/ml） | 平均%CV |
|---|---|
| 1.6 | 0.1 |
| 0.8 | 0.2 |
| 0.4 | 0.8 |
| 0.2 | 1.6 |
| 0.1 | 2.1 |
| 0.05 | 2.7 |
表4. hIgGを含むサンプルのアッセイ間精度
| 濃度（ng/ml） | 計算された濃度 | 平均%CV |
|---|---|---|
| 1.2 | 1.25 | 7.6 |
| 1.0 | 1.01 | 0.9 |
| 0.8 | 0.76 | 2.6 |
| 0.6 | 0.64 | 8.6 |
| 0.4 | 0.37 | 6.3 |
| 0.2 | 0.18 | 13.0 |
| 0.1 | 0.09 | 10.4 |
| 0.05 | 0.05 | 9.0 |
精度
表5. 標準曲線サンプルの精度
| 濃度（ng/ml） | 平均エラー率 | 平均回復率 |
|---|---|---|
| 1.6 | 0.0 | 100 |
| 0.8 | 0.4 | 100 |
| 0.4 | -0.7 | 99 |
| 0.2 | -1.3 | 99 |
| 0.1 | 2.1 | 102 |
| 0.05 | 7.3 | 107 |
表6. hIgGを含むサンプルの精度
| 濃度（ng/ml） | 計算された コンク |
平均エラー率 | 平均% 回復 |
|---|---|---|---|
| 1.2 | 1.25 | 3.8 | 104 |
| 1.0 | 1.01 | 1.2 | 101 |
| 0.8 | 0.76 | -4.5 | 96 |
| 0.6 | 0.64 | 5.9 | 106 |
| 0.4 | 0.37 | -8.2 | 92 |
| 0.2 | 0.18 | -8.0 | 92 |
| 0.1 | 0.09 | -8.8 | 91 |
| 0.05 | 0.05 | -7.8 | 92 |
定量限界（LoQ）
標準曲線から算出されたLoQは0.025 ng/mlでした。hIgG存在下でのMabSelect SuRe™リガンド添加サンプルのLOQは0.115 ng/mlまたは0.920 ng/mg（0.92 ppm）でした。このデータセットに基づくと、免疫グロブリン存在下でMabSelect SuRe™リガンドを検出する本キットの感度は1 ppm未満です。
希釈の直線性
図 1. テストした MabSelect SuRe™ リガンド濃度の範囲全体にわたって精度の高い相関関係を示す希釈グラフの直線性。
結論
アッセイ内データは、2.3つのアッセイの精度が許容範囲内であることを示しており、標準品の% CV値は7.5～0.025%の範囲でした。この一連の実験の標準LoQはXNUMX ng/mlでした。
アッセイ内データでは、hIgGを含むサンプルは相対精度と精度で測定され、% CV値は11.0～4.1%でした。サンプルのLoQは0.115 ng/mlと算出されました。%相対誤差で測定した真度は、標準物質で7.3～-1.3、サンプルで-8.8～5.9でした。
アッセイ間データでも同様の結果が得られました。標準曲線サンプル間の% CVは全ての濃度で2.7未満であり、13.0つのアッセイ全体で高い精度を示しました。hIgGを含むサンプルも高い精度を示し、LoQを超える濃度では% CVは0.9～XNUMX%の範囲でした。
計算の説明
精度（%CV）
精度は、rPAを添加したサンプルデータポイント間の標準偏差を求め、平均値で割ることによって算出されました。「業界向けガイダンス：バイオ分析法バリデーション」のテキストによると、精度は15%以内である必要があります。
アッセイ内精度
すべてのアッセイの %CV 値を平均することにより、rPA を添加したサンプル濃度ごとにアッセイ内精度を計算しました。
アッセイ間精度
アッセイ間の精度は、3 つのアッセイそれぞれから計算された結果間の標準偏差を決定し、平均値で割ることによって各濃度ポイントで計算されました。
定量限界（LoQ）
定量限界（LoQ）は、10 ng/mlサンプルの標準偏差の0倍と定義されました。0 ng/ml OD値の標準偏差を10倍し、0 ng/ml OD値を基準値として加算しました。そして、その合計値を標準曲線の4パラメータ近似式に入力することで、LoQを算出しました。各キットのLoQは、緩衝液XNUMXmlあたりのngプロテインA（ng/ml）として、またhIgG存在下でrPAを添加したサンプルの場合はhIgG XNUMXmgあたりのngプロテインA（ppm）として報告されました。
検出限界（LoD）
検出限界（LoD）は、3 ng/mlのプロテインAの標準偏差の0倍と定義されました。
サンプル。0 ng/ml OD値の標準偏差を3倍し、0 ng/ml OD値を基準値として加えました。そして、その合計値を標準曲線の4パラメータ近似式に入力することで、LoDを算出しました。各キットのLoDは、緩衝液XNUMXmlあたりのngプロテインA濃度（ng/ml）とppm（百万分率）で示されました。
精度
精度は、理論上の添加濃度と比較したアッセイによって決定された回収率（%）として表されます。
MabSelect™、MabSelect SuRe™、SuRe™ は、GE Healthcare の登録商標です。