NGL-Impact® A ELISAキットの性能概要

はじめに

リプリゲンNGLインパクト^® ELISAキット（カタログ番号9222-1）は、残留NGL-Impactの検出と定量を目的としています。^® プロテインA。微量の汚染物質NGL-Impactを測定するための高感度アッセイを必要とするユーザー向けに開発されました。^® 抗体製品のA。NGLの影響試験^® 汚染は開発と商業製造のいくつかの異なる段階で発生しますが、これには次のようなものが含まれます。

特定の条件下での樹脂の浸出特性に関するプロセス開発
製造、通常は精製プロセスの複数のポイントで採取した溶出サンプルから
プロセスの封じ込めレベルとロット間の一貫性を文書化するために製品リリースを完了します。

以下の要約レポートには、NGLインパクトの評価から収集されたパフォーマンスデータが含まれています。^® ヒト免疫グロブリンG（hIgG）存在下でのELISAキット。ここで提示されたデータは以下を示しています。

NGL衝撃を検出する能力^® Dilute & Go法を用いてPBS-T緩衝液中のhIgG濃度が最大0.5 mg/mlの場合、またはBoil & Boost法を用いてhIgG濃度が最大10 mg/mlの場合
回収率（正確性）、アッセイ間およびアッセイ内精度、定量限界および検出限界

結果の概要

NGL-インパクト^® hIgG存在下でのA

Repligen NGL-Impactのパフォーマンス^® NGL-Impactを検出する際にELISAキットを評価した。^® hIgG存在下におけるAとhIgGを含まない標準物質との比較。NGL-Impact^® 添加サンプルは、アッセイプレートに希釈した場合はhIgG初期濃度0.5 mg/ml、煮沸法を用いた場合はhIgG初期濃度10 mg/mlでした。各添加サンプルは3回繰り返して調製し、キットの標準プロトコルに従ってELISAを実施しました。

データ処理

標準曲線のデータポイントは線形回帰直線に当てはめられた。この式により、サンプルのNGL影響度を逆算することができた。^® 濃度とLoQ値の計算。回収率は以下のように計算しました。

回復率 = 計算された濃度 X100
理論濃度

アッセイ内精度

表1. 標準曲線サンプルのアッセイ内精度（hlgGなし）

濃度（ng/ml）	平均%CV
1.6	0.8
0.8	5.3
0.4	2.0
0.2	1.3
0.1	5.7
0.05	7.1

表2. Dilute & GoによるhIgGを含むサンプルのアッセイ内精度

濃度（ng/ml）	計算された濃度	平均%CV
1.0	1.09	1.0
0.5	0.58	2.6
0.25	0.26	2.4

表3. Boil & BoostによるhlgG含有サンプルのアッセイ内精度

濃度（ng/ml）	計算された濃度	平均%CV
1.0	1.10	3.4
0.5	0.50	3.5
0.25	0.24	1.6

インターアッセイ精度

表4. 標準曲線サンプルのアッセイ間精度（hlgGなし）

濃度（ng/ml）	平均%CV
1.6	1.0
0.8	3.1
0.4	3.2
0.2	2.6
0.1	7.2
0.05	21.1 *

*濃度はLLOQ未満です

表5. Dilute & GoによるhIgG含有サンプルの測定間精度

濃度（ng/ml）	計算された濃度	平均%CV
1.0	1.09	6.2
0.5	0.58	2.4
0.25	0.26	5.5

表6. Boil & Boost法によるhlgG含有サンプルのインターアッセイ精度

濃度（ng/ml）	計算された濃度	平均%CV
1.0	1.10	3.7
0.5	0.50	7.5
0.25	0.24	4.7

精度

表7. 標準曲線サンプルの精度

濃度（ng/ml）	平均エラー率	平均回復率
1.6	-2.5	97.5
0.8	6.3	106.3
0.4	14.2	114.2
0.2	8.6	108.6
0.1	-10.6	89.4
0.05	-51.6 *	48.4 *

*濃度はLLOQ未満です

表9. Boil & BoostによるhlgGを含むサンプルの精度

濃度（ng/ml）	平均エラー率	平均回復率
1.0	9.8	109.8
0.5	0.1	100.1
0.25	-5.6	94.4

表8. Dilute & GoによるhlgGを含むサンプルの精度

濃度（ng/ml）	平均エラー率	平均回復率
1.0	8.6	108.6
0.5	15.1	115.1
0.25	3.7	103.7

定量限界（LoQ）

IgGが存在しない標準曲線から決定されたLoQは0.07 ng/mlと計算されました。NGL-ImpactのLoQはXNUMX ng/mlでした。^® hIgG が存在する状態でスパイクされたサンプルは、Dilute & Go 法を使用した場合は 0.87 ppm、Boil & Boost 法を使用した場合は 0.048 ppm でした。

検出限界（LoD）

標準曲線から決定されたLoDは0.06 ng/mlと計算されました。NGL-ImpactのLoQは^® hIgG が存在する状態でスパイクされたサンプルは、Dilute & Go では 0.64 ppm、Boil & Boost では 0.04 ppm でした。

希釈の直線性

図 1. Dilute & Go 法と Boil & Boost 法の両方で IgG の存在下でテストした濃度範囲全体にわたって精度の高い相関関係を示す希釈グラフの直線性。

結論

アッセイ内データは、標準曲線サンプルの精度が許容範囲内であり、% CV値が0.8～7.1%の範囲にあることを示しました。アッセイ内データは、サンプルが相対的な正確性と精度で測定されたことを示しました。

試験間データは、データの再現性を示しました。試験間の変動係数は、LoQ以上の濃度において7.2%以下でした。サンプル間の試験精度は2.4～7.5%の範囲でした。

LoQ を超える濃度の精度は、相対誤差の割合で評価すると、標準の場合 -10.6 ～ 14.2、Dilute & Go 法および Boil & Boost 法で分析されたサンプルの場合 -5.6 ～ 15.1 でした。

LoQ 以上のすべてのサンプル濃度の % CV 値は 1.0 ～ 3.5% で、15% の制限を下回りました。

計算の説明

精度（%CV）

精度は、NGL-Impact間の標準偏差を決定することによって計算されました。^® スパイクされたサンプルデータポイントを平均値で割ったもの。「業界向けガイダンス：バイオ分析法バリデーション」のテキストによると、精度は15%以内である必要があります。

アッセイ内精度

各NGL-Impactについて、アッセイ内精度を計算した。^® すべてのアッセイの %CV 値を平均化してサンプル濃度を調整します。

アッセイ間精度

アッセイ間の精度は、3 つのアッセイそれぞれから計算された結果間の標準偏差を決定し、平均値で割ることによって各濃度ポイントで計算されました。

定量限界（LoQ）

定量限界（LoQ）は、10 ng/mlサンプルの標準偏差の0倍と定義されました。0 ng/mlのOD値の標準偏差を10倍し、0 ng/mlのOD値を基準値として加えました。そして、その合計値を一次方程式に代入することでLoQを算出しました。各キットのLoQはng NGL-Impactとして報告されました。^® 1 ml あたり (ng/ml) のバッファーと ng NGL-Impact^® NGL-Impactの1mg当たりのhIgG（ppm）^® hIgG が存在する状態でスパイクされたサンプルを実行します。

検出限界（LoD）

検出限界（LoD）は、3 ng/mlプロテインAサンプルの標準偏差の0倍と定義されました。0 ng/mlのOD値の標準偏差を3倍し、0 ng/mlのOD値を基準値として加えました。そして、その合計値を標準曲線の式に入力することでLoDを算出しました。各キットのLoDはng NGL-Impactとして報告されました。^® 1mlあたり（ng/ml）のバッファーとIgG濃度に対する百万分率（ppm）単位。

精度

精度は、理論上の添加濃度と比較したアッセイによって決定された回収率（%）として表されます。