AVIPure® AAVアフィニティー樹脂
AVIPure® AAV および HiPer™ AAV アフィニティ レジンは、アデノ随伴ウイルス (AAV) 2、8、および 9 ベクターのキャプチャ ステップ精製を提供し、高い結合容量と高速流速を実現して迅速なキャプチャを実現します。
ビオズの提供
優れた性能
- 高い動的結合容量
- 高い標的分子純度とpH 3.0での完全な溶出
- 革新的なマクロポーラスビーズ技術
プロセス生産性の向上
- 迅速な処理のための効率的な物質移動
- 滞留時間はわずか30～60秒
- 高速流量をサポート
安定性と拡張性
- 0.5 M NaOHに10時間さらした後も80%以上のDBCを保持
- プロセス開発から商業生産まで簡単に拡張できるように設計されています
次世代のアフィニティ樹脂技術
Repligen の次世代アフィニティークロマトグラフィー樹脂、AVIPure® HiPer™ AAV 樹脂をご紹介します。
AVIPure® HiPer™ AAVレジンは、革新的なマクロポーラスビーズ構造を採用しており、ビーズ内およびビーズ周囲での対流を可能にします。従来のレジンとは異なり、この大きな細孔構造は表面積を最大化し、高い動的結合容量を実現すると同時に、迅速なフロースルーと溶出をサポートします。
これらの大きな細孔は、ウイルスベクター、ウイルス、核酸などの高分子生物製剤の精製に最適です。
現在、この技術を用いたAVIPure® HiPer™ AAV9レジンおよびAVIPure® HiPer™ AAV8レジンが利用可能です。今後、HiPer™フォーマットを用いたAAVレジンも提供予定です。
高速流量でも高性能
AVIPure® HiPer™ AAV9アフィニティーレジンは、主要な市販AAVアフィニティーレジンと比較して、高流速下でも一貫して高い結合容量（30秒の滞留時間で1.0E+15）を提供し、処理の高速化を可能にします。このレジンは鋭いブレークスルー曲線を示し、貴重なカプシド物質の損失を最小限に抑えます。
動的結合容量は 5% のブレークスルーとして表されます。
滞留時間 30 秒後および滞留時間 60 秒後の AVIPure® HiPer™ AAV9 樹脂と主要な市販樹脂「樹脂 T」の動的結合容量を比較しました。
AVIPure® HiPer™ AAV9樹脂は、堅牢で信頼性の高いパフォーマンスを提供します。収量、宿主細胞タンパク質の対数減少率、および残留リガンド量は、20回の生産サイクルにわたって一定に保たれます。
プロセスパラメータには次のものが含まれます。
力価: Progen AAV9 XPeress ELISA
収量: Progen AAV9 XPeress ELISA
HCP純度：Cygnus HEK293 HCP ELISA
HCDNA純度: ThermoFisher Quant-iT
HMW凝集体：HP-SEC、Phenomenex Biozen dSEC-7、700Å、3µm、150×4.6mm
残留リガンド：Cygnus Avitide AVIPure® – AAV9残留リガンドアッセイキット - (F970)
AVIPure® HiPer™ AAV8アフィニティーレジンは、長時間の定置洗浄（CIP）サイクルを通して高い性能を維持します。0.5 M NaOHへの曝露に少なくとも10時間耐え、初期の動的結合容量の80%を維持します。
AVIPure® HiPer™ AAV8 樹脂を 0.5 M NaOH に 10 時間さらす前とさらした後の動的結合容量。
AVIPure® HiPer™ AAV8樹脂は、前世代のAVIPure® AAV8樹脂と比較してAAV8樹脂技術の進化を象徴する製品であり、低導電率バッファーを用いてpH 3でNaClを必要とせずに完全な溶出を実現します。低導電率溶出により、陰イオン交換を用いたポリッシュステップ前の希釈率を低減し、空カプシドと完全カプシドの分離を可能にします。
AVIPure® HiPer™ AAV8樹脂は、NaClなしでpH 3で完全な溶出を実現します。NaClを必要とするプロセスでは、150 mM NaClを用いたpH 2での溶出もサポートします。
拡張性を重視した設計
AVIPure® HiPer™樹脂は、プロセス開発から商業生産まで容易にスケールアップできるように設計されています。効率的な物質移動、高い標的分子収率、そして迅速な処理により、プロセス効率が向上します。
2段階キャプチャとポリッシュソリューション
AVIPure® HiPer™ AAVアフィニティー樹脂とHiPer™ QA樹脂を組み合わせることで、AAVのキャプチャーとポリッシングのための2段階ソリューションが実現します。他の市販樹脂とは異なり、HiPer™ QA樹脂はAAV製造におけるポリッシング段階に特化して設計されており、標的AAVゲノムを含む空カプシドと完全カプシドの分離を実現します。この2段階精製プロセスにより、プロセス効率を犠牲にすることなく高純度が得られ、遺伝子治療薬製造における安全性と有効性をサポートします。
高性能
アガロースマトリックス上の高性能AAVアフィニティー樹脂
AVIPureの前世代® AAV 2、5、8、9アフィニティー樹脂は、他のプラットフォームで開発された樹脂の性能指標を満たすか上回り、さらに強力なアルカリ安定性という利点も備えています。アフィニティー樹脂は、下流工程の簡素化を可能にします。NaOH安定性アフィニティー樹脂はプロセスを簡素化し、プロセス全体の経済性を飛躍的に向上させます。これらの樹脂は、GMP製造プロセスの継続性をサポートするために引き続きご利用いただけます。
- 20サイクル後も高い宿主細胞タンパク質（HCP）クリアランスと残留DNAクリアランスレベルを維持
- 樹脂の寿命中、0.1～0.5 M NaOHを使用して日常の洗浄と消毒を行う
- 滞留時間が短くても高い動的結合容量があるため、事前濃縮されたフィードまたは直接キャプチャでの使用が可能です。
- > 2 x 1014 1分間の滞留時間でのvp/mL樹脂
- > 7 x 1014 4分間の滞留時間でのvp/mL樹脂
低 pH アフィニティークロマトグラフィー溶出が AAV 導入に与える影響
アフィニティークロマトグラフィーは遺伝子治療用の AAV の効率的な精製を可能にしますが、溶出に酸性 pH (pH 2～3) を使用すると、ウイルスの安定性に関する懸念が生じます。さまざまな pH 条件と温度での研究では、25°C では感染性への影響は最小限で、8°C では AAV40 の凝集と感染性の喪失が見られました。下流の精製全体を通じて、ウイルスの凝集は捕捉プロセスではなくカプシド濃度に関連しており、溶出後の即時の pH 中和は安定性のリスクを軽減するのに役立ちます。
NaOH CIP再生でパフォーマンスを維持
2 サイクルの研究で使用された単一の AVIPure® AAV31 カラムからの 15 サイクルごとのオーバーレイ。NaOH による洗浄後の堅牢なクロマトグラフィー性能を示しています。最終サイクルでの合計 NaOH 曝露時間は XNUMX 時間でした。
宿主細胞タンパク質（HCP）と宿主細胞DNA（hcDNA）の一貫した高い収量とクリアランスは、単一のAVIPureで31サイクルにわたって達成されました。® AAV2 カラム。収量は市販の AAV2 Progen ELISA キットを使用して測定し、HCP は HCP ELISA で測定し、hcDNA は Picogreen アッセイで測定しました。平均収量は 105%、HCP は平均 4.0 ログ減少して 977 ppm、hcDNA は平均 2.8 ログ減少して 400 ppm でした。
2分間の滞留時間で結合し、より多くのHCPとDNAを除去
AVIPureを使用してAAV細胞培養フィード（濃縮されていない）ストリームを直接捕捉し、結合、洗浄、溶出する® AAV2 樹脂。
2 分間の滞留時間により、既存の事前濃縮ステップが不要になりました。生成物は 50 mM グリシン、150 mM NaCl、0.01% P188、pH 3 で 85% の回収率で溶出されました。
AVIPure® AAV2 樹脂と競合する AAV アフィニティー樹脂を同一条件下で実行しました。溶出生成物は SDS-PAGE、HCP、残留 DNA によって純度が分析されました。
AVIPure AAV2 樹脂と競合する AAV アフィニティー樹脂を同一条件 (滞留時間 2 分) で実行し、溶出生成物の純度を SDS-PAGE、HCP、および残留 DNA で分析しました。AVIPure AAV2 樹脂は、SDS-PAGE で残留 HCP が 7 倍、残留 DNA が 1.5 倍、不純物タンパク質が少ない精製生成物を提供しました。
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AVIPure® AAV2 樹脂は、残留 HCP が 7 分の XNUMX に低い精製製品を提供しました。
AVIPure® AAV2 樹脂は、SDS-PAGE により残留 DNA が 1.5 倍少なく、不純物タンパク質が少ない精製製品を提供しました。
市場投入までのスピード
OPUSで事前に梱包して入手可能® 迅速な展開のための列
AVIPure® AAVアフィニティー樹脂は、事前に梱包され、事前に認定されたOPUSで入手可能です。® 迅速な GMP 実装用カラムとルース樹脂フォーマットのカラム。
OPUS® カラムを使用すると、事前にパックされ、事前に認定されたクロマトグラフィーカラムを使用して、開発から製造規模まで数週間で進めることができます。
AVIPure® AAV2、5、8、9 樹脂特性
|
カテゴリー |
詳細説明 |
|---|---|
| ベースマトリックス | 架橋アガロース、球状 |
| 粒子サイズ（d50V) | 約50µm |
| リガンド |
AAV2、AAV5、AAV8: アルカリ耐性組換えタンパク質（動物由来成分不使用） AAV9: アルカリ耐性、ペプチド（合成） |
| カップリング化学 |
AAV2: チオール |
| 結合能力 |
滞留時間が短くても高い動的結合容量があるため、事前濃縮されたフィードまたは直接キャプチャでの使用が可能です。 |
| バッファ互換性 | 8 M尿素、6 Mグアニジン塩酸塩、エチレングリコール、洗剤など、一般的に使用されるすべての水性緩衝液に対して安定です。 |
| 溶剤適合性 | 水、アルコール（0～20% v/v）、アセトニトリル、1～2 M酢酸、その他の一般的な有機溶媒 |
| pHの安定性 | 1-13 |
| 定置洗浄安定性 | 0.1-0.5 M NaOH |
| 圧力/流量a | 3 bar、>300 cm/時 |
| 最大圧力（ΔP）a | 40のプサイ |
| 温度安定性 | 2-40°C |
| 配送条件 | 2%ベンジルアルコール |
| 保管 | 2～8℃、2%ベンジルアルコールまたは18～20%エタノール、凍結禁止 |
| a 2.6 x 20 cmのカラムに4 barの圧力で充填 |
ソリューション
顧客第一。
サポートは Repligen の DNA の一部です。当社の目標は、優れた顧客体験を提供し、すべての Repligen 製品とサービスの効率的で成功した導入と実装をサポートすることです。
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